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慢病毒構(gòu)建并包裝后，以進(jìn)行貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。具體流程如下： 1. 對(duì)慢病毒基因進(jìn)行改造，即敲除U3端的400bp的特定基因，使其逆轉(zhuǎn)錄和整合的能力，但保留產(chǎn)生病毒顆粒必須的蛋白的能力。 2. 向上述基因中插入目的基因。與具有包裝功能的質(zhì)粒同時(shí)進(jìn)行對(duì)包裝細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。在細(xì)胞上清中獲得攜帶目的基因的復(fù)制缺陷型慢病毒載體顆粒。

三種擴(kuò)大貼壁細(xì)胞培養(yǎng)的方法：維持其在培養(yǎng)皿表面（2D）的生長(zhǎng)狀態(tài)，進(jìn)行傳代培養(yǎng)放大；進(jìn)行貼壁細(xì)胞分離，隨后在發(fā)酵罐的3D培養(yǎng)中進(jìn)行小試到大規(guī)模的逐級(jí)放大；采用含有微載體的攪拌發(fā)酵罐進(jìn)行培養(yǎng)。2D培養(yǎng)即采用多培養(yǎng)皿或多層搖瓶進(jìn)行培養(yǎng)放大。

傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進(jìn)行培養(yǎng)的過(guò)程。$n$n原理：細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，須進(jìn)行傳代再培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞。因此，欲構(gòu)建細(xì)胞株，首先需獲得穩(wěn)定的細(xì)胞系。構(gòu)建流程如下： 1. 細(xì)胞培養(yǎng)（原核：大腸桿菌，真核：CHO細(xì)胞） 2. 質(zhì)粒的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。 3. 向轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)基中加入抗生素規(guī)定濃度的抗生素進(jìn)行穩(wěn)定細(xì)胞株篩選。 4. Western blot或ELISA檢測(cè)蛋白的表達(dá)情況，篩選比較高克隆進(jìn)行傳代并保存

凡是來(lái)源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來(lái)的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。人或動(dòng)物體內(nèi)（或胚胎組織）由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來(lái)。

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。